非小细胞肺癌（NSCLC）是临床常见肺癌类型，具有发病率、病死率高的特点。由于NSCLC早期症状不明显，患者确诊时大多已处于中晚期，即使采用外科手术切除病灶，术后复发率仍可高达到20%~60%^[1]。因此，探讨NSCLC根治术后复发的影响因素是目前亟待解决的问题。NSCLC的发生发展是一个多因素、多步骤的过程^[2]，近年来，临床逐渐重视蛋白因子的表达与NSCLC的关系。4E结合蛋白1（4EBP1）是一种低分子蛋白质，与肿瘤的发展、转移息息相关^[3]，有研究发现^[4]，磷酸化4EBP1（p-4EBP1）过表达是乳腺癌发生发展的重要机制之一。另有研究发现，抑制p-4EBP1可抵抗肿瘤活性，阻止癌细胞增殖^[5]。据此推测，p-4EBP1可能与NSCLC的发生发展存在一定的关系。本研究检测NSCLC患者肺癌组织中p-4EBP1蛋白表达情况，并分析其与NSCLC根治术后复发的的关系，以期为临床治疗提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取本院2020年1月—2021年1月收治的111例行根治术的NSCLC患者。纳入标准：1）均经病理检查确诊为NSCLC；2）均行肺癌根治术治疗；3）依从性好，配合临床检查；4）均签署本研究知情同意书。排除标准：1）复发性或转移性NSCLC；2）严重脏器功能不全者；3）精神疾病或认知障碍者；4）血液、免疫系统疾病者；5）合并结核等传染性疾病者；6）术前行放化疗患者；7）合并其他肿瘤疾病者。111例NSCLC患者中男72例，女39例；年龄45~76岁，平均（62.35±7.41）岁；病理类型：鳞癌37例，腺癌68例，其他6例；临床分期：Ⅰ期7例，Ⅱ期45例，Ⅲa期59例；最大肿瘤直径：≤3 cm 53例，＞3 cm 58例；分化程度：高分化31例，中分化50例，低分化30例；淋巴结转移48例。本研究已通过医院伦理委员会审核批准。

1.2 方法

1.2.1 收集NSCLC患者临床资料

包括患者年龄、性别、吸烟史、病理类型、肿瘤直径、临床分期、淋巴结转移、术后化疗。

1.2.2 免疫组化法检测p-4EBP1蛋白表达

收集手术切除的肺癌组织和癌旁组织，制成石蜡标本切片，将待检测的组织切片标本置于3%的过氧化氢溶液中灭活内源性酶，用蒸馏水充分洗涤，使用柠檬酸钠缓冲液热修复抗原，滴加一抗（兔抗人p-4EBP1多克隆抗体，购自江苏厚普生物科技有限公司），隔日滴加二抗（HRP标记的抗兔二抗，购自福州迈信生物有限公司），37℃孵育20 min，添加3，3-二氨基苯联染色液染色，多余液体用蒸馏水充分洗涤，使用苏木素复染，脱水、封片。在高倍镜下随机选取10个不重复视野评价蛋白表达情况，p-4EBP1蛋白主要表达于细胞质，阳性细胞百分比评分：染色细胞占观察视野细胞的1%~25%记为1分，＞25%~50%记为2分，＞50%~75%记为3分，＞75%记为4分。细胞染色强度评分：未着色记为0分，淡黄色、浅黄色记为1分，黄色记为2分，棕褐色记为3分。计算2项得分总和，0~1分为蛋白阴性表达，其余则为阳性表达^[6]。

1.2.3 随访

所有患者均随访1年，于术后第1、3、6、12个月来院复查，采用影像学检查结合病理检查明确患者是否存在残端病变或出现肿瘤复发，统计患者术后1年复发情况，并据此将其分为复发组和未复发组。

1.3 统计学分析

采用SPSS 18.0软件进行数据处理，计量资料以均数±标准差（$\stackrel{-}{x}\pm s$）表示，比较采用独立样本t检验；计数资料以例（%）表示，比较采用χ²检验，若任一理论频数为0，采用Fisher’s精确检验；NSCLC根治术后复发的影响因素采用多因素回归分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 NSCLC患者肺癌组织和癌旁组织p-4EBP1蛋白阳性表达率比较

NSCLC患者肺癌组织p-4EBP1蛋白阳性表达率为70.27%（78/111），高于癌旁组织p-4EBP1蛋白阳性表达率16.22%（18/111），差异有统计学意义（χ²=66.073，P＜0.001），NSCLC患者肺癌组织及癌旁组织中p-4EBP1蛋白表达见图1、2。

2.2 NSCLC不同临床病理特征患者肺癌组织p-4EBP1蛋白阳性表达率比较

不同性别、年龄、病理类型、最大肿瘤直径患者肺癌组织p-4EBP1蛋白表达阳性率比较差异均无统计学意义（P＞0.05）；临床分期Ⅲa期、低分化、淋巴结转移患者肺癌组织p-4EBP1蛋白表达阳性率分别高于临床分期Ⅰ、Ⅱ期和中高分化、无淋巴结转移患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

2.3 NSCLC患者根治术后复发组和未复发组肺癌组织p-4EBP1蛋白表达阳性表达率比较

111例NSCLC患者根治术后随访时间平均为（1.40±0.26）年，术后1年内有20例复发、91例未复发，复发率为18.02%（20/111）。复发组肺癌组织p-4EBP1蛋白阳性表达率为90.00%（18/20），高于未复发组的65.93%（60/91），差异有统计学意义（χ²=4.546，P＜0.05）。

2.4 复发组与未复发组患者临床资料比较

两组性别、年龄、病理类型、最大肿瘤直径、术后化疗周期比较差异无统计学意义（P＞0.05）；复发组有吸烟史、临床分期Ⅲa期、低分化、淋巴结转移占比均高于未复发组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

2.5 影响NSCLC患者根治术后复发的多因素分析

将NSCLC患者根治术后1年内有无复发作为因变量，将吸烟史、临床分期、分化程度、淋巴结转移、肺癌组织p-4EBP1蛋白表达作为自变量，纳入到Cox回归模型中，结果显示：有吸烟史、临床分期Ⅲa期、低分化、淋巴结转移、肺癌组织p-4EBP1蛋白阳性表达均是NSCLC患者根治术后复发的危险因素（P＜0.05）。见表3。

3 讨论

近年来NSCLC发病率与死亡率逐渐增加，其发病机制复杂，目前外科手术切除仍是治疗NSCLC的重要手段，但受术后复发、转移的影响，患者预后仍不理想^[7]。Evison等^[8]调查发现Ⅰ~Ⅲ期NSCLC约有36%患者在术后2年内复发，本研究跟踪NSCLC根治术后1年内复发情况，发现复发率高达18.02%，证实了NSCLC术后复发的风险较高。因此，探讨影响NSCLC根治术后复发的影响因素对指导临床防控工作很有必要。

近年来随着肿瘤分子靶向治疗的发展，对细胞增殖、分化、凋亡、恶性转变起重要调控作用的PI3K-AKT-mTOR通路已成为临床研究的热点，该信号通路在乳腺癌、NSCLC、结肠癌等多种恶性肿瘤中发挥重要作用^[9-11]。4EBP1是mTOR的下游靶点，受mTOR活化和磷酸化，可直接与真核细胞起始因子4E结合，竞争性抑制装配和翻译，影响蛋白质的合成，将上游增殖信号因子转化为致癌蛋白。既往相关研究报道^[12-13]，p-4EBP1蛋白在食管癌、脑膜瘤等恶性肿瘤中阳性表达率显著高于正常组织，且p-4EBP1蛋白表达与肿瘤临床分期、组织学分级、浸润深度具有相关性。本研究结果显示，肺癌组织p-4EBP1蛋白阳性表达率均高于癌旁组织，且临床分期Ⅲa期、低分化、淋巴结转移患者肺癌组织p-4EBP1蛋白表达阳性率分别高于临床分期Ⅰ、Ⅱ期和中高分化、无淋巴结转移患者，与上述研究报道一致，表明p-4EBP1蛋白不但可能参与NSCLC的发病机制，还可能与疾病的进展相关，p-4EBP1蛋白有望成为评估NSCLC发病、临床分期、淋巴结转移的潜在参考指标。Luo等^[14]通过细胞实验抑制p-4EBP1蛋白过表达，发现可以有效抑制肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭能力及上皮间质转化；Naito等^[15]报道p-4EBP1可促进eIF4E/4EBP1的解离，进而导致eIF4E依赖性翻译起始促进肿瘤细胞存活、生长和转移，且对肾细胞癌的复发转移独立相关；Alabdullah等^[16]发现p-4EBP1蛋白高表达与卵巢癌无进展生存期呈负相关，是卵巢癌无进展生存期的独立预测因子。据此推测，肺癌p-4EBP1蛋白阳性表达率越高，NSCLC患者中瘤细胞增殖、侵袭、上皮间质转化等恶性能力越强，术后残端恶化潜能越大，进而增加了复发风险。本研究通过对NSCLC根治术后患者进行随访发现，复发组肺癌组织p-4EBP1蛋白阳性表达率高于未复发组，且经多因素回归分析证实肺癌组织p-4EBP1蛋白阳性表达是NSCLC根治术后复发的危险因素，说明癌组织p-4EBP1蛋白阳性表达可能影响NSCLC复发，有望成为NSCLC的潜在治疗靶点。

本研究通过多因素回归分析还发现，有吸烟史、临床分期Ⅲa期、低分化、淋巴结转移也是NSCLC根治术后复发的危险因素。分析原因：吸烟是肺癌发生主要因素之一，Li等^[17]报道从不吸烟NSCLC患者治疗获益和预后大于吸烟患者；临床分期是目前评估肺癌预后的重要指标之一，分期越晚，肿瘤转移、复发风险越高，预后越差；低分化说明癌细胞恶性程度高，疾病进展及治疗后复发风险高；淋巴结转移提示癌细胞已经通过淋巴循环转移，不但治疗难度增加，复发风险也大大升高^[18]。

综上所述，NSCLC患者肺癌组织p-4EBP1蛋白阳性表达率较高，与临床分期、分化程度、淋巴结转移相关，可能是NSCLC根治术后复发的危险因素，提示p-4EBP1蛋白表达可能为临床评估NSCLC发病、临床分期、预后等提供一定的，也为p-4EBP1蛋白作为治疗NSCLC的潜在靶点提供了更多的证据。但本研究还存在一定的不足，p-4EBP1蛋白在NSCLC中的作用机制尚需通过动物或细胞研究证实，未来如何降低NSCLC患者肺癌组织p-4EBP1蛋白表达也需进一步研究探讨。

参考文献